SemenLeu (Xét nghiệm bạch cầu trong tinh dịch)
Hãng sản xuất/Xuất xứ: ANTIGENES GmbH / Đức
Ứng dụng:
SemenLeu (Xét nghiệm bạch cầu trong tinh dịch) là để phát hiện nồng độ bạch cầu tăng cao trong tinh dịch. Nồng độ bạch cầu tăng cao trong tinh dịch có liên quan đến nhiễm trùng đường sinh dục, chất lượng tinh dịch kém và thất bại trong thụ tinh trong ống nghiệm/chuyển phôi.
Bạch cầu, đặc biệt là bạch cầu đa nhân đa hình (PML), có trong hầu hết các lần xuất tinh của con người. Khi soi kính hiển vi thông thường, các tế bào này có thể dễ dàng bị nhầm lẫn về mặt hình thái với các tế bào hỗ trợ tinh trùng đa nhân.
Nguyên lý của phương pháp:
Bằng cách sử dụng hydrogen peroxide (H2O2), các bạch cầu dương tính với peroxidase (bạch cầu trung tính đa hình) có thể được nhuộm màu vàng đến nâu. Các tế bào khác (tinh trùng, tế bào lympho, tế bào đơn nhân, đại thực bào và tinh trùng đa nhân) vẫn không bị nhuộm (âm tính với peroxidase). Với bộ dụng cụ này, tinh dịch được xử lý bằng thuốc thử 1 và 2 trong đó chỉ có các tế bào dương tính với peroxidase vẫn còn màu nâu. Những tế bào này có thể được xác định bằng kính hiển vi tương phản pha.
Bảo quản:
Thời hạn sử dụng là 24 tháng kể từ thời điểm sản xuất.
Bảo quản trong khoảng 2-8 ° C.
Không sử dụng sau khi hết hạn.
Quy cách:
– Thuốc thử 1: 20 ml
– Thuốc thử 2: 1 ml
Hướng dẫn sử dụng:
Đồ dùng cần thiết
- Tấm kính phủ (18 x 18 mm)
- Buồng ướt
- Găng tay
- Kính hiển vi
- Tinh dịch tự nhiên hoặc tinh trùng đã rửa (100 μl)
- Các tấm slide
- Khăn giấy
- Pipet và đầu tip (10-100 và 100-1000 μl)
- Ống nghiệm (2 ml)
- Giá đỡ ống nghiệm
- Buồng đếm tế bào
- Chuẩn bị dung dịch làm việc AB:
Trộn 1 ml thuốc thử 1 với 20 μl thuốc thử 2. Trong trường hợp nghiên cứu nhiều mẫu hơn, bạn phải tính toán lượng dung dịch AB thích hợp. - Cách dùng: 1. Hút 100 μl dịch tinh dịch vào ống nghiệm
-
- Thêm 900 μl dung dịch AB
- Trộn nhẹ dung dịch AB và tinh trùng (tránh tạo bọt)
- Ủ hỗn hợp ở nhiệt độ phòng 20-30 phút
- Lặp lại bước 3
- Hút hỗn hợp vào buồng đếm. Đặt buồng đếm bốn phút trong buồng ướt để lắng xuống tất cả các tế bào lớn.
-
Mục tiêu đánh giá: số lượng bạch cầu trong tinh dịch Theo quan sát dưới kính hiển vi, bạch cầu có màu vàng đến nâu do peroxidase. Tổng số tế bào dương tính với peroxidase trong mỗi lần xuất tinh có thể được tính theo một trong các cách sau:
Nồng độ tinh trùng đã biết:
Đếm số tế bào dương tính với peroxidase và tinh trùng trong ít nhất 20 trường nhìn ở độ phóng đại 400 lần. Nồng độ bạch cầu được tính bằng công thức sau: (Số lượng bạch cầu / số lượng tinh trùng) x nồng độ tinh trùng (triệu / ml)
Phương pháp này chỉ phù hợp với những mẫu có chứa hơn 10 triệu tế bào tinh trùng/ml.
Nồng độ tinh trùng chưa biết:
Trong trường hợp này, nồng độ bạch cầu được xác định bằng cách nhân với một hệ số có được từ kích thước của trường nhìn và chiều cao của khoảng cách giữa buồng đếm và tấm kính phủ (hoặc độ sâu của mẫu tinh dịch). Đường kính của trường nhìn có thể được đo bằng micrômet. Diện tích bề mặt (s) tương ứng với bình phương của bán kính (r) nhân với pi (s = лr²).
Ví dụ: đường kính trường nhìn = 250 μm, bán kính = 125 μm → diện tích (giây) = 49086 μm2
Chiều cao giữa phiến kính và tấm kính phủ có thể được tính theo công thức sau: chiều cao [μm] = thể tích (μl) / (chiều dài [μl] x chiều rộng (mm) của tấm kính phủ. Ví dụ: thể tích mẫu = 20 μl. Tấm kính phủ = 24 x 40 mm — chiều cao = 20/(24×40) = 0,0208 mm = 20,8 μm.
Hệ số nhân nồng độ tế bào bạch cầu được tính toán từ các giá trị sau: Hệ số = 1.000.000 μm3 (diện tích x chiều cao).
Ví dụ: Hệ số = 1.000.000 μm³ / (49086 μm2 x 20,8 μm) = 0,98.
Ví dụ, nếu đếm năm tế bào bạch cầu trong một trường nhìn, hệ số này sẽ cho kết quả nồng độ 4,9 triệu tế bào bạch cầu trên một ml tinh dịch. Ở những người đàn ông có khả năng sinh sản, giá trị của các tế bào bạch cầu dương tính với peroxidase nằm trong khoảng từ 0,5×106 đến 106 với tổng số lượng bạch cầu (tế bào dương tính với peroxidase và tế bào âm tính với peroxidase) từ 106 đến 2×106 trên một ml tinh dịch [6].
Sự hiện diện quá mức của các tế bào này (bạch cầu do tinh trùng gây ra) có thể biểu hiện nhiễm trùng đầu hạt. Bạch cầu do tinh trùng gây ra cũng có thể liên quan đến sự rối loạn của hồ sơ hạt, bao gồm giảm thể tích tinh dịch, nồng độ tinh trùng và khả năng vận động của tinh trùng và mất chức năng tinh trùng do stress oxy hóa [1, 2] hoặc tiết ra các cytokine gây độc tế bào. Do đó, rất khó để đưa ra giới hạn chính xác về nồng độ bạch cầu mà khả năng sinh sản bị suy giảm. Ảnh hưởng của các tế bào này phụ thuộc vào vị trí trong kênh sinh sản mà từ đó bạch cầu đi vào tinh trùng, loại bạch cầu và mức độ hoạt hóa. Nếu dịch tinh dịch chứa nhiều hơn 1×106 tế bào bạch cầu trên ml, các mẫu cần được xét nghiệm vi sinh để tìm nhiễm trùng tuyến.
Cảnh báo:
Xử lý tất cả các mẫu vật như thể có khả năng truyền HIV hoặc viêm gan.
Luôn mặc quần áo bảo hộ khi xử lý mẫu vật.
Thuốc thử 1 chứa ortho-toluidine, được phân loại như chất gây ung thư. Tránh tiếp xúc với da hoặc nuốt phải.
Thuốc thử 2 chứa hydrogen peroxide (H2O2). Nó là ăn mòn và độc hại khi hít phải. Tránh tiếp xúc với da hoặc nuốt phải.
Trong trường hợp bị tai nạn do thuốc thử 1 và/hoặc 2, quần áo bị nhiễm thuốc thử phải cởi ra ngay lập tức và tham khảo ý kiến bác sĩ.
Chi tiết sản phẩm: